细胞培养的污染始终是困扰各位研究者的难题。严重的污染不仅让数周的辛苦付诸东流，更可能导致实验数据失真，影响结果。本文将系统梳理细胞培养中常见的污染类型，并提供具体、可操作的全方位对策，解决这个难题。
常见的细胞污染分为以下几种类型：
01 细菌污染
识别特征：
培养液变化：短期内（24-48小时内）变得浑浊，静置后可见底部有沉淀（细菌团）。
pH值变化：培养液颜色迅速变黄（产酸），即便频繁换液也无法维持。
显微镜下：在高倍镜下可见大量细小的、颗粒状的物质在做“布朗运动”，细胞生长停滞，形态变差，最终大量死亡。
图 细胞细菌污染图
对策：
将污染培养物高压灭菌后丢弃，避免交叉污染。用75%乙醇彻底擦拭培养箱和超净工作台。
预防：
严格执行无菌操作规范，穿戴实验服、手套、口罩；对所有入孵育箱的试剂进行无菌测试；枪头、培养瓶等耗材确保无菌，开封前用酒精或紫外消毒外包装。
02 真菌污染
识别特征：
肉眼可见：培养液中出现白色或浅黄色的絮状、球状漂浮物。
显微镜下：霉菌菌丝呈细丝状结构，类似树枝；酵母菌呈卵圆形或球形，常出芽生殖。
图 细胞真菌污染图
对策：
同细菌污染，立即丢弃并彻底清洁环境。
预防：
真菌孢子无处不在且难以杀灭，需加强超净台的紫外线照射时间（至少30分钟），并保持实验室环境的干燥与整洁。
03 支原体污染
识别特征：
培养液不浑浊，细胞病变不明显，但细胞状态变差：生长缓慢、贴壁性下降、易凋亡。必须通过特定方法检测，如DNA荧光染色或专门的支原体检测试剂盒。
图 细胞支原体污染图
对策：
立即隔离疑似污染的细胞，并对所有细胞系进行常规支原体检测；使用专业的支原体清除试剂，按说明书治疗一段时间后，再次检测确认是否转阴。
预防：
对新引进的细胞系进行强制性的支原体检疫；使用支原体预防剂；严禁共用培养基、胰酶等试剂，严禁用同一瓶试剂处理多株细胞。
04 黑胶虫污染
识别特征：
培养液始终清亮、不浑浊、不变色；细胞间隙或表面出现“小黑点”“小碎片”，密度随传代递增；黑点呈原地布朗运动，不定向游动；营养消耗快, 需频繁换液；空泡化、拉丝、脱落；青霉素-链霉素、庆大、两性霉素B均不能清除。
图 细胞黑胶虫污染图
对策：
对于非珍贵细胞，最安全的方法是直接丢弃污染细胞，彻底消毒，从根本上杜绝扩散；对于珍贵细胞，可联用多种抗生素尝试抑制，或者直接购买市面上的支原体清除试剂，挽救细胞。
预防：
规范无菌操作、使用质量可靠的血清（可热灭活）、定期清洁消毒培养箱和水浴锅；务必定期冻存纯净的细胞种子，遭遇污染后及时复苏；使用支原体预防试剂进行预防。
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