SP Sepharose HP的预装柱说明书

货号：YA2571

规格：1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL

保存：2-8℃

一、产品说明： SP Sepharose HP 是将磺丙基键合在高流速琼脂糖凝胶上形成的一种强阳离子交换介质，具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

二、介质性能参数

三、纯化流程：

1、Buffer 的准备 

所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。

平衡: 平衡液是低浓度的缓冲溶液，如 NaAC、PBS 等。

洗杂液：目标产品结合到柱子上用平衡液洗去杂质。

洗脱液：SP Sepharose HP可用增大盐浓度或增大pH值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。 

注: 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。盐浓度小，介

质对样品组分吸附较牢。用 CM 介质时，推荐的操作 pH 值应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。

2、样品准备 

样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。盐浓度太大的样品需要处理后再配。

3、样品纯化

1) 上柱：将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。

2) 水洗：用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。

3) 平衡：使用至少5倍柱体积的平衡液平衡色谱柱。

4) 利用泵或样品环上样。

   样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再配。

5) 洗杂：用洗杂液冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。

6) 洗脱：CM 介质可用增大盐浓度或增大 pH 值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。

7) 再生：一般用高盐浓度的缓冲液（含1~2mol/L NaCl）洗或增大pH洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

4、在位清洗：(1)对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

          (2)对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

          (3)对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

           清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

5、注意：在使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

6、去热源

用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

（1）2倍柱体积的70%乙醇；

（2）2倍柱体积50mM Tris-HCl pH7.5；

（3）1倍柱体积4M尿素；

（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M NaCl；

以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

四、注意事项

产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。避免与氧化剂接触；避免在pH< 4的环境中长时间暴露(一周，20℃)。