成都百美科生物科技有限公司
                            
                                
                            
                        
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将试剂抗原或试剂抗体用荧光素进行标记,试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后,测定复合物中的荧光素,这种免疫技术,称为免疫荧光素技术。
    常见荧光素:
        ⑴FITC
        ⑵RB200
        ⑶TRITC
        ⑷镧系:Eu、Tb
        ⑸PE
        ⑹其它
    实验步骤: 
        1. 4 µ m石蜡切,60℃烤,30min。
        2. 常规脱蜡至水(二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10min,无水乙醇,95%乙醇,85%乙醇,75%乙醇各2min)。
        3. PBS洗(磷酸盐缓冲液0.01mol/L pH7.4)3×3min。
        4. 0.1%胰蛋白酶(100ml蒸馏水中加入100mg胰蛋白酶,100mg氯化钙,用0.1N NaoH调pH至7.6),37℃,消化30min。(或其他修复方法)
        5. 0.01mol/L pH7.4 PBS洗3×3min。
        6. 兔抗人AFP1:50(用专用抗体稀释液稀释)37℃,1h或室温4h,或4℃过夜。
        7. PBS洗3×3min。
        8. 羊抗兔IgG-F,1:20稀释,37℃,1h,室温2h。
        9. PBS洗3×3min。
        10.蒸馏水洗3min。
        11.pH9.0缓冲甘油封片。
        12.镜检,阳性呈明亮绿色荧光。
    荧光信号增强封片剂
        mowiol 40-88         4.8g
        甘油                 12ml
        蒸馏水               12ml
        0.2mol/L Tris(pH8.5)     24ml
 
    上述混合(加热溶解),5000g离心,15min,最后加入1.4-diazobicydo-[2,2,2]-octane(DABcos),终浓度2.5%(约1.25g),溶解后,分装存于-20℃中。
