在蛋白质研究中，N端测序（N-terminal sequencing）是揭示蛋白质起始氨基酸序列的关键技术，被广泛应用于蛋白鉴定、质量控制、结构解析等领域。然而，N端测序并非一蹴而就，如何确保精准度并提高成功率？今天，我们就为你揭秘N端测序的核心秘诀，助力你的科研更进一步！

秘诀一：样品制备决定测序质量

优质的样品是精准测序的基础。不恰当的样品处理会导致测序失败，甚至产生误导性数据，因此在制备样品时需注意以下要点：

1、确保蛋白样品高纯度

蛋白质的纯度直接影响N端测序的结果。建议使用凝胶电泳（SDS-PAGE）或液相色谱（HPLC）纯化蛋白，去除杂质，减少背景干扰。

2、避免干扰性试剂

过量的盐、去污剂、变性剂（如SDS、尿素）或高浓度缓冲液可能干扰测序反应，影响氨基酸释放。因此，在N端测序前，应优化缓冲液成分，必要时可通过透析或超滤进行去除。

3、警惕N端封闭问题

部分蛋白在翻译后可能会发生N端修饰（如乙酰化或甲酰化），导致Edman降解无法直接测序。对于这类蛋白，可采用化学或酶促处理去除修饰，或选择基于质谱的N端测序方法来绕开这一障碍。

秘诀二：选择合适的N端测序方法

N端测序的成功不仅取决于样品质量，还依赖于选择适合的技术。目前常用的N端测序方法包括：

Edman降解法——经典精准但受限1、

Edman降解法是一种逐步切割蛋白N端氨基酸并依次检测的经典方法，具有高精准度和单氨基酸解析能力。但该方法存在以下限制：

• 无法解析N端封闭的蛋白（如乙酰化蛋白）
• 不适用于复杂混合蛋白样品，需事先进行蛋白纯化
• 序列读取长度有限，一般适用于短多肽测序

2、基于质谱的N端测序——突破局限，快速高效

随着质谱技术的发展，高分辨率质谱（如LC-MS/MS）已成为N端测序的重要工具，特别适用于复杂样品和N端修饰蛋白。

• 适用范围广：可直接分析复杂蛋白混合物，无需严格纯化
• 突破N端封闭限制：结合特定酶切策略，可分析被修饰的N端
• 速度快，灵敏度高：能在短时间内解析复杂蛋白样本的信息

选择合适的方法不仅能提高测序成功率，还能节省大量时间和资源，因此，在进行N端测序前，应综合考虑样品性质、实验需求和设备条件。

秘诀三：精准数据解析，确保结果可靠

成功的N端测序不仅依赖实验技术，还离不开精准的数据解析。以下三大关键点可帮助提高数据可靠性：

信号优化，避免背景干扰1、

测序过程中可能会受到非特异性信号干扰，因此，数据解析时需采用优化的算法和背景校正技术，提高信噪比，以减少误判。

数据库比对，提高序列匹配准确性2、

对于Edman降解法，每步释放的氨基酸需与标准氨基酸色谱比对，以确认其身份。而在质谱测序中，利用蛋白数据库搜索可进一步提高N端序列匹配的可靠性。

交叉验证，确保数据一致性3、

对于重要的蛋白样本，建议结合其他蛋白质组学方法（如蛋白指纹图谱分析、全蛋白测序等）进行交叉验证，以确保N端测序结果的准确性和可靠性。

N端测序的精准性不仅依赖于技术本身，更需要研究人员在样品制备、方法选择、数据解析等环节下足功夫。掌握这些核心秘诀，才能真正发挥N端测序的优势，助力蛋白研究更进一步！百泰派克生物科技提供准确且快速的N端测序服务，获国家CNAS实验室认可，助力研究人员全面理解相关内容。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目