原代细胞概念、培养步骤、污染预防

原代细胞（Primary cells）指采用酶、螯合剂或机械方法直接从活体组织或器官中分离出来的细胞。严格来说，从机体分离出来到成功传代之前的细胞称为原代细胞；但考虑到原代细胞可在体外分裂10~15次的特性，以及取材难度大、分离和培养成本高等因素，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞。

原代细胞离体时间短且未经修饰，与体内状态相似度高，生物学特性未发生很大变化，仍保持了细胞在体内的许多重要标志和功能。因此，相比较于细胞系而言，通过原代细胞所获取的实验数据与体内生理功能更接近、更能真实反映体内环境。

在生物医学研究中，原代细胞更适合用于药物测试、细胞分化和转化等实验，而且还可以有效避免涉及动物实验方面的伦理争议。在生物制药方面，原代细胞也是理想的细胞模型，可用于疾病机制研究、药物筛选、药物代谢和毒理学研究等。

原代细胞的完整培养可分为6个步骤：取材、组织分离、细胞过滤和计数、接种和培养、传代与维持、冻存和复苏。

原代细胞对外界环境非常敏感，实验环境的细微变化都可能影响细胞的存活和功能。因此，需要严格控制上述实验的环境条件，保证在无菌环境中进行操作，还要控制温度、湿度和二氧化碳浓度等，从而确保细胞活力和最佳的培养效果。

在原代细胞培养过程中，很容易引发微生物污染，如：取材阶段，由于是从人类或动物组织中分离的，因此易携带共生菌群和亚临床感染等常见的微生物污染源。故在组织获取、组织解离和细胞培养等环节，均普遍采用抗生素防污染。常用的抗生素包括青霉素、链霉素、庆大霉素、两性霉素B、氨苄青霉素和卡那霉素等。但不建议长期使用抗生素，因为某些试剂（如两性霉素B）从长期来看可能对细胞有毒；并且不同抗生素会对细胞的代谢、增值、分化，甚至是基因表达都有不同程度的影响。

原代细胞抗生素的应用

已知，抗生素的使用，虽然能预防原代细胞污染，但也引入了新的问题。因此，既能确保原代细胞不受污染，又对细胞毒害性小的抗生素就成了迫切需求。不仅如此，细菌、真菌、支原体等的污染也是影响原代细胞生长和发挥正常功能的因素，对细菌、真菌、支原体污染可有效预防，也是原代细胞对所需抗生素的硬性要求。

为此，翌圣生物自主研发了Antimicrobia Agent for Primary Cells原代细胞抗生素，其是用于原代细胞培养，无菌过滤，淡黄色溶液，储存液浓度为50 mg/mL，推荐使用浓度为100-300μg/mL。

该原代细胞抗生素是一种广谱抗生素制剂，旨在保护原代细胞免受微生物污染。原代细胞细胞模型很容易受到来自宿主动物或细胞分离过程中的自然菌群污染。本产品能够提供全面的微生物污染预防。它对革兰氏阳性菌（例如芽孢杆菌和葡萄球菌属）和革兰氏阴性菌（例如大肠杆菌，肠杆菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌）、支原体和真菌都有抑制作用。

翌圣生物的原代细胞抗生素可提供最大程度的保护原代细胞，当它作用于微生物污染时，具有最小细胞毒性。本产品由多种抗生素组成，其中三种作用于支原体、革兰氏阳性和革兰氏阴性这些化合物靶向DNA旋转酶和原核生物核糖体亚基（30S和50S），因此阻断DNA和蛋白质分别合成。其它成分可以根除真菌，包括酵母菌等。

产品特点

· 

广谱防污染：可以预防细菌、真菌（包括酵母菌）、支原体等微生物污染；

· 

强普适性：适用于原代细胞培养、类器官培养、干细胞培养等；

· 

多应用场景：可在细胞培养全过程中使用（如培养基、清洗溶液等）；

· 

低细胞毒性：对细胞毒性小，可最大程度保护原代细胞的活性和正常生长。

实验数据

通过抑菌实验，测定原代细胞抗生素体外抑制微生物生长效力。其中，翌圣原代细胞抗生素和竞品A的使用浓度分别为33、50、100μg/mL。然后将稀释好的不同浓度梯度的原代细胞抗生素溶液和提前配制好的细菌真菌悬液混合，接种于培养基中。在适宜的温度和湿度条件下进行培养。观察并记录细菌真菌的生长情况，判断原代细胞抗生素对细菌真菌的生长抑制情况。根据下述结果，可以看出，翌圣生物的原代细胞抗生素较竞品A，有更好的抑菌效果。

图1.原代细胞抗生素对细菌真菌的抑菌圈实验

翌圣生物的原代细胞抗生素处理细胞后，分别使用CCK-8和细胞计数的方式对细胞活力和增殖情况进行检测：从下图可以看出加入原代细胞抗生素，对细胞活力和细胞增殖几乎无影响。

图2. 原代细胞抗生素加入前后细胞活力和细胞增殖情况图

产品信息